Fluoreszenzmikroskop ist eine Art von Lichtmikroskop, in der Regel das Objekt zu beobachten ist transparent, oder die innere Struktur kann nicht gut von der Farbe unterschieden werden, dann ist das Fluoreszenzmikroskop eine gute Wahl, um das Problem zu lösen, dass das gewöhnliche Mikroskop nicht beobachten kann das transparente Material. Das Prinzip des Fluoreszenzmikroskops besteht darin, das untersuchte Objekt, das mit Fluorescein eingefärbt wurde, mit kurzwelligem Licht zu bestrahlen, so dass es zu langwelliger Fluoreszenz angeregt wird, die es dem Betrachter ermöglicht, die innere Struktur der Probe zu erkennen. In einem Fluoreszenzmikroskop muss eine bestimmte Wellenlänge des Anregungslichts aus der Beleuchtung der Probe ausgewählt werden, um Fluoreszenz zu erzeugen, und dann muss die Fluoreszenz von dem gemischten Anregungs- und Fluoreszenzlicht für die Beobachtung getrennt werden. Daher spielt das Filtersystem eine äußerst wichtige Rolle bei der Auswahl einer bestimmten Wellenlänge. Fluoreszenzmikroskope sind in biologischen und medizinischen Bereichen weit verbreitet.
Ein Fluoreszenzmikroskop umfasst die folgenden grundlegenden Komponenten:
a. Lichtquelle: in der Regel Xenon-Bogenlampen oder Quecksilberdampflampen, aber in den letzten Jahren werden auch Hochleistungs-LEDs verwendet.
b. Filter (einfallendes Licht): reduziert die Wellenlänge des einfallenden Lichts, so dass nur die Wellenlänge übrig bleibt, die zur Anregung der Probe verwendet wird; interessanterweise wird dies als Anregungsfilter bezeichnet.
c. Dichroitischer Spiegel oder Reflektor: Reflektiert das Anregungslicht auf die Probe und lässt gleichzeitig nur das von der Probe emittierte Licht zum Detektor durch (wie unten dargestellt).
d. Filter (Emission): Lässt nur die Wellenlänge des Emissionslichts der Probe durch und blockiert das gesamte Licht, das durch den Anregungsfilter gelangt, der erwartungsgemäß als Emissionsfilter bezeichnet wird.
e. CCD-Kamera: Das emittierte Licht ist nutzlos, wenn es nicht erkannt werden kann; bei der Fluoreszenzbildgebung ist der Detektor in der Regel eine CCD-Kamera, die auch an einen Computerbildschirm angeschlossen ist, der Ihnen ein Bild anzeigen kann.
Dichroitische Spiegel lassen Licht längerer Wellenlängen durch den Filter hindurch, während Licht kürzerer Wellenlängen reflektiert wird
Klassifizierung der Fluoreszenzmikroskopie:
Fluoreszenzmikroskope werden im Allgemeinen in zwei Typen eingeteilt: Transmissions- und Fallout-Mikroskope:
a. Transmissiv: das Anregungslicht kommt von unterhalb des untersuchten Objekts, und das Spektiv ist ein Dunkelfeld-Spektiv, so dass das Anregungslicht nicht in die Objektivlinse eintritt, aber die Fluoreszenz tritt in die Objektivlinse. Es ist hell bei geringer Vergrößerung, während die hohe Vergrößerung ist dunkel, in der Öl-Immersion und Tuning, schwieriger zu bedienen, vor allem bei geringer Vergrößerung der Beleuchtungsbereich ist schwer zu bestimmen, kann aber eine sehr dunkle Sichtfeld des Hintergrunds zu bekommen. Die Übertragung Art ist nicht für nicht-transparente untersuchte Objekte verwendet.
b. Fallender Typ: Der Transmissions-Typ ist derzeit fast eliminiert, das neue Fluoreszenzmikroskop ist meist fallender Typ, die Lichtquelle ist von der Oberseite des untersuchten Objekts, und es gibt einen strahlteilenden Spiegel im optischen Pfad, so dass es sowohl für transparente und undurchsichtige untersuchte Objekte geeignet ist. Da die Objektivlinse die Rolle einer Fokussierungslinse spielt, ist es nicht nur einfach zu bedienen, sondern kann auch von niedriger bis hoher Vergrößerung eine gleichmäßige Ausleuchtung des gesamten Sichtfeldes erreichen.
Typischer Strahlengang eines Falllicht-Fluoreszenzmikroskops