Introducción a los instrumentos de etiquetado enzimático
El etiquetador enzimático, es decir, el detector de inmunoensayo enzimático, es un instrumento especial para el ensayo inmunoenzimático. De hecho, es un colorímetro fotoeléctrico especial o espectrofotómetro disfrazado, y su principio de funcionamiento básico y estructura principal son básicamente los mismos que los del colorímetro fotoeléctrico. Puede dividirse simplemente en 2 categorías: semiautomático y automático, pero su principio de funcionamiento es básicamente el mismo, y su núcleo es un colorímetro, es decir, analizar el contenido de antígeno o anticuerpo por método colorimétrico.
¿Qué es un ensayo enzimático?
El método de ensayo inmunoenzimático (ELISA), denominado ELISA, es una de las técnicas de etiquetado, desarrollada a partir de la técnica de anticuerpos fluorescentes y la técnica de inmunoensayo isotópico, que constituye una técnica moderna sensible, específica, rápida y automatizada.
El principio básico del marcaje enzimático consiste en combinar un antígeno o anticuerpo con una enzima utilizando un colágeno para formar un antígeno o anticuerpo marcado con una enzima, que puede reaccionar específicamente con el antígeno o anticuerpo correspondiente en el soporte en fase sólida o en el tejido, y unirse firmemente para formar un complejo inmunitario que permanece activo. Cuando se añade el sustrato correspondiente, éste es catalizado por la enzima y muestra el color de reacción correspondiente. El color es proporcional a la cantidad del antígeno o anticuerpo correspondiente.
Dado que esta técnica se basa en la reacción antígeno-anticuerpo y en la eficaz catálisis de las enzimas, es muy sensible y específica, lo que la convierte en una técnica de prueba inmunológica extremadamente viable.
Principio del instrumento de etiquetado enzimático
El etiquetador enzimático es la aplicación del principio del instrumento de etiquetado enzimático, el etiquetador enzimático es similar a un colorímetro fotoeléctrico de cambio de fase o espectrofotómetro, su principio básico de funcionamiento y la estructura principal y el colorímetro fotoeléctrico es básicamente el mismo.
La onda luminosa de la lámpara de la fuente de luz se convierte en un haz de luz monocromática a través del filtro o monocromador, que entra en el espécimen a ensayar en el polo microporoso de plástico. La luz monocromática es parcialmente absorbida por el espécimen, la otra parte se irradia a través del espécimen al detector fotoeléctrico, el detector fotoeléctrico será diferentes especímenes a ensayar y la intensidad de las diferentes señales de luz en las señales eléctricas correspondientes, las señales eléctricas por el preamplificador, amplificación logarítmica, conversión analógica a digital y otro procesamiento de señales se envía al microprocesador para el procesamiento de datos y cálculos, y luego por la pantalla y la impresora para mostrar los resultados.
El microprocesador también mueve la microplaca controlando el movimiento del mecanismo de accionamiento mecánico en las direcciones X e Y a través del circuito de control, realizando así un proceso automatizado de detección de alimentación de muestras. Otras etiquetadoras enzimáticas utilizan el movimiento manual de la placa de microtitulación para la detección, eliminando así la necesidad de mecanismos de accionamiento mecánico y circuitos de control en las direcciones X e Y, lo que hace que el instrumento sea más compacto y sencillo en su estructura.
La placa de microtitulación es un tipo de placa de plástico transparente especialmente diseñada para colocar muestras que se van a analizar mediante tratamiento previo, hay muchas filas de pequeños orificios de tamaño uniforme en la placa, los orificios están incrustados con el antígeno o anticuerpo correspondiente, y cada orificio de la placa de microtitulación puede contener unos pocos mililitros de solución. Sus especificaciones comunes son placa de 40 pocillos, placa de 55 pocillos, placa de 96 pocillos y así sucesivamente, diferentes instrumentos utilizan diferentes especificaciones de la placa, que pueden ser detectados agujero por agujero o fila por fila.
Un ensayo de zimografía es la detección del valor de absorbancia de una sustancia medida a una longitud de onda específica. Con el desarrollo de los ensayos, los marcadores enzimáticos únicos de sobremesa con múltiples modos de detección se denominan marcadores enzimáticos multifuncionales, que pueden detectar la absorbancia (Abs), la intensidad de fluorescencia (FI), la fluorescencia resuelta en el tiempo (TRF), la polarización de fluorescencia (FP) y la quimioluminiscencia (Lum).
Los marcadores enzimáticos pueden dividirse en marcadores enzimáticos de tipo rejilla y marcadores enzimáticos de tipo filtro. Los marcadores enzimáticos de tipo rejilla pueden interceptar cualquier longitud de onda dentro de la gama de longitudes de onda de la fuente de luz, mientras que los marcadores enzimáticos de tipo filtro sólo pueden interceptar longitudes de onda específicas para la detección según los filtros opcionales.
Estructura del etiquetador enzimático
La luz monocromática utilizada en el etiquetador de enzimas puede obtenerse mediante un filtro coherente o utilizando el mismo monocromador que en el espectrofotómetro. En el uso de filtros como un dispositivo de filtro con el mismo que el colorímetro ordinario, el filtro se puede colocar delante de la microplaca, también se puede colocar en la parte posterior de la microplaca, el efecto es el mismo. La luz emitida por la lámpara de la fuente de luz a través del espejo concentrador, la columna de luz después de alcanzar el reflector, el reflector para la reflexión de 90 ° verticalmente a través de la solución colorimétrica, y luego se envía al tubo fotoeléctrico a través del filtro.
Las etiquetadoras enzimáticas pueden dividirse en 2 tipos: monocanal y multicanal, y las monocanal pueden dividirse en 2 tipos: automática y manual. El tipo automático tiene un mecanismo de accionamiento mecánico en dirección X e Y, que puede enviar los pequeños pocillos de la microplaca L uno por uno bajo el haz de luz para la prueba, mientras que el tipo manual se basa en el movimiento manual de la microplaca para llevar a cabo las mediciones.
Sobre la base de etiquetadora enzimática de un solo canal ha desarrollado etiquetadora enzimática multicanal, tal etiquetadora enzimática es generalmente de tipo automatizado. Está equipado con múltiples haces de luz y múltiples fotodetectores, tales como 12 canales del instrumento está equipado con 12 haces de luz o 12 de luz, 12 detectores y 12 amplificadores, en la dirección X del dispositivo de accionamiento mecánico bajo la acción de las muestras 12 para una fila para ser detectados. Los etiquetadores enzimáticos multicanal tienen una velocidad de detección rápida, pero su estructura es más compleja y costosa.
Diagrama esquemático del etiquetador de enzimas